精索静脉曲张(VC)是导致
男性不育症的主要原因,但该病引起不育的机制至今尚未完全阐明。为了从免疫学角度进一步了解其与该病的关系,采用流式细胞计数仪从2002年12月-2004年12月观察了20 例VC不育症患者精索静脉血和外周血中免疫细胞的改变,随机选择18 例年龄相同的腹股沟斜疝患者为对照组,同法检测。同时两组患者精索静脉血与外周血中性激素水平采用化学发光法测定和精液分析。报告如下:
目的:了解精索静脉曲张(VC)患者的免疫功能和性激素状态,为所致不育提供参考资料。
方法:选择20 例24~35 岁VC患者精索静脉血和外周静脉血进行免疫细胞、性激素和精液检测。随机选择18 例年龄相同、已生育的腹股沟斜疝患者为对照组,同法检测。
结果:VC患者多项免疫指标值低于对照组,精索静脉血性激素与对照组差异有显着性。
结论:VC患者机体免疫功能降低,可能是破坏血睾屏障、损害睾丸致睾酮降低的原因之一;精索静脉血可反映VC患者血中性激素实际水平。
1 资料与方法
1.1 一般资料
临床诊断VC的患者(曲张组)20 例,其中左侧18 例,右侧2 例,临床分度均为Ⅲ度(采用Ⅲ度法);年龄24~35 岁。病程2~5年。术前行彩色多普勒超声和3次精液分析检查,排除可能存在的睾丸和附属性腺疾病及其他可能影响精液质量的因素。精索静脉低位结扎术中从已结扎的精索静脉近睾丸侧抽取精索静脉血3 mL,同时抽取外周血3 mL,立即送检,对照组选取18 例26~36 岁,已生育的腹股沟斜疝患者(斜疝组),经彩色多普勒超声检查,排除精索静脉曲张。在行疝修补术时抽取精索静脉血和外周血液标本。
1.2 检测方法
免疫细胞测定取精索静脉血及外周血各100 μL,分别加单抗20 μL[IMKLymphocyte SimultestTM试剂盒(BD公司)]低速度混旋,置于室温暗处孵育20 min;加入红细胞裂解液,混匀,置室温暗处5 min,直至溶液外观呈现澄清透明状,立即离心;倾去上清,低速混匀,加入5 mL PBS,离心,如此以PBS液洗2次。倾去上清后,每管加入固定液0.5 mL,置于4℃冰箱10 min,待流式细胞计数仪(FACSCalibur,BD)分析。流式细胞仪安装软件Cell Quest,每个试管获取细胞数15 000个。
卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)和泌乳素(PRL)测定采用化学发光法,试剂由美国拜耳公司提供,操作按药盒说明书进行。测量仪器为美国拜耳公司的ACS:180 SE自动化学发光系列。
两组精液分析,精液标本于禁欲1周后用手淫法取得,并立即于恒温箱中保存,液化后进行检测。仪器采用北京清华同方彩色精子电脑检测系统(按照WTO标准)。
1.3 统计学处理
所有数据均用±s表示,组间比较采用t检验进行统计学处理,P<0.05表示差异有显着性。
2 结 果
2.1 两组患者精索静脉血免疫细胞检测结果(见表1)表1 两组精索静脉血免疫细胞的测定结果
2.2 两组外周血免疫细胞测定结果(见表2) 表2 两组外周血免疫细胞测定结果
2.3 两组患者精索静脉血FSH、LH、T、PRL检测结果(见表3)表3 两组精索静脉血FSH、LH、T、PRL测定结果
2.4 两组外周血FSH、LH、T、PRL测定结果(见表4) 表4 两组外周血FSH、LH、T、PRL测定结果
2.5 两组患者精液分析检测结果(见表5)表5 两组精液分析结果
3 讨 论
VC多见于青壮年,在男性人群中的发病率为10%~15%,而在男性不育中占21%~41%。其导致不育的原因被认为是由于曲张静脉内血液滞留,使睾丸局部温度升高,影响睾丸血液循环,CO2蓄积和代谢产物抑制精子发育,引起精子过早脱落,使精子不能正常成熟。还有内分泌功能障碍、代谢物质反流等学说[1]。但造成不育的机制尚不清楚。
近年来随着基础医学研究的进展,尤其是免疫学的飞速发展,人们发现免疫因素在VC不育中起着重要作用[2]。在正常情况下由于受到生殖系统血睾屏障的隔离作用、免疫抑制功能及机体主动免疫调节机制等因素制约,机体并不产生自身免疫反应。当免疫功能低下时可影响机体防御屏障功能,使上述保护作用受损,致使精子抗原与机体自身的免疫发生接触而产生抗精子抗体(AsAb),进而干扰正常精子的形成及发育,引起
无精或
少精而导致不育[3]。本研究从确诊的VC患者做精索静脉低位结扎时采集近睾丸侧的静脉血,应用流式细胞计数仪测定免疫细胞的变化,这部分血能反映睾丸的免疫和代谢情况。研究显示VC患者精索静脉血和外周静脉血多项免疫指标值均低于对照组,其中CD4、CD4/CD8、Bcell等指标下降最为显着(P<0.05),提示VC可引起体液免疫和细胞免疫活动的变化,推测这种机体免疫功能降低因素有可能成为破坏血睾屏障的原因之一。进而能更好地解释为何精索静脉曲张多发生于一侧,而却造成双侧睾丸组织损害。
VC可引起睾丸间质水肿、间质血管病变及对侧睾丸的病变等病理损害[4]。由于间质细胞的损害会导致外周血中性激素水平的改变,从而反馈影响下丘脑垂体睾丸轴,使血液FSH、LH和PRL水平发生变化,但国内外文献对VC患者血清性激素水平的变化报道很不一致。王益鑫等[5]的研究认为VC患者血清FSH、LH、T均在正常值范围。而另有报道VC患者血清FSH、PRI明显高于正常人,T则与正常人无差异[6、7]。本研究采用精索静脉血与外周血分别与对照组进行比较,结果显示VC患者外周血FSH、LH值升高,T值与对照组差异无显着性(P>0.05);而精索静脉血FSH、LH值升高,T值则降低(P<0.05)。可能与本组VC均为重度曲张病例、睾丸受损较重、间质细胞T的分泌受到抑制,而致使精索静脉血T浓度下降有关。由于VC所致睾丸的损害随时间越长越严重,受损的曲细精管及间质细胞越多,使FSH、LH升高,刺激间质细胞维持T正常水平,但最终逐渐失代偿,睾丸曲细精管和间质细胞功能受损严重,至此FSH、LH已处于高值,而T始终处于低水平。外周血的性激素浓度可受多种因素影响,睾丸、附睾、肾上腺、前列腺组织中T含量明显高于血中T浓度[8]。睾酮在某些靶器官的高浓度聚集可影响外周血T浓度,而外周血的稀释作用也是不能忽略的一个重要因素。我们认为由于以上多种因素可影响外周血中性激素浓度,而精索静脉血则较少受以上因素影响,能较为真实地反映VC患者血中性激素的水平。
精液分析是评价男性生育力的最基本方法,可对70%的男性不育原因做出明确诊断,其中精液量、精子密度、精子活力及精子活率等是提示睾丸生精功能的重要指标。本文分析结果表明,VC对睾丸功能的影响在精液中主要表现在精子数目减少、畸形精子异常增加、精子活动度降低。故此精子质与量的改变可能是VC不育的主要原因。
参考来源:《临床医药实践》2006年11月15卷11期;《精索静脉曲张不育患者免疫学和性激素的研究》;常江平