【摘要】目的 探讨无精子因子(AZF)微缺失与男性不育症之间的关系。方法 随机检测来笔者所在医院就诊男性不育患者51例及20例正常生育史男性的AZF基因,并要求先了解相关精液特征,根据精液特征将患者分为无精子症30例、严重少精子症及少精子症21例两组;分别比较两个实验组与对照组AZF基因微缺失检出率。结果 51例不育男性中检测出Y染色体AZF微缺失7例,其中30例无精子症组检测出Y染色体AZF微缺失5例,21例严重少精子症及少精子症组检测出Y染色体AZF微缺失2例。正常对照组均未见Y染色体AZF微缺失。结论AZF微缺失的检测对原发性男性不育具有重要的临床指导意义,值得临床推广应用。
【关键词】男性不育;无精子因子
根据有关统计学资料,在我国正常家庭,不孕不育问题中有40%左右系男方问题。笔者通过对51例男性不育患者进行无精子因子(AZF)检测,探讨排除合并其他男性疾病后,原发性无精及少弱精症患者与AZF微缺失的关系,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机抽取2010年11月~2012年4月来笔者所在医院就诊的男性不育患者51例,年龄24~39岁,平均(29.5±6.3)岁。其中精液经离心沉淀后,连续2次显微镜检查常规精液均未发现精子者(无精子症)30例;连续两次常规精液分析精子密度均<5×106/mL或a级<5%(严重少精子症)及连续2次常规精液分析精子密度均为<20×106/mL(少精子症)者21例,分别分为无精子症组和严重少精子症及少精子症组。并排除合并其他男科疾病。另选择20例正常生育史男性健康志愿者作为对照组,年龄26~37岁,平均(30.7±4.4)岁。两组患者在性别、年龄等一般资料比较(P>0.05),差异无统计学意义,具有可比性。
1.2 AZF检测方法
抽取受试者外周血3 mL,EDTA-K2抗凝后严格按照DNA提取试剂盒(HQ&Q Blood DNA Kit,安徽优晶生物工程有限公司)说明提取DNA。再进行多重PCR扩增,以性别决定基因SRY作为内参照,每个AZF区域设置2个序列标签位点(sequence tagged sites,STS),AZFa为SY84、SY86;AZFb为SY127、SY134;AZFc为SY254、SY255。所有DNA样品均经2次多重PCR完成,称为Multiplex A和B,每次多重PCR均包括AZFa、b、e区域的STS和对照基因引物。在Multiplex A中完成SRY、SY254、SY127、SY86的扩增;在Multiplex B完成SRY、SY134、SY84、SY255的扩增。PCR扩增产物经3.0%琼脂糖凝胶电泳(恒压130 V)40 min,用GEL Doc2000凝胶成像系统进行DNA电泳条带的观察。
1.3 统计学处理
采用统计学软件SPSS 13.0进行统计学分析,计量资料用(x±s)的形式表示,采用t检验,计数资料用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组与AZF微缺失概况比较
51例不育患者中AZF基因微缺失7例,无精子症组有2例AZFa缺失,1例AZFa+AZFb+AZFc缺失,1例AZFb+AZFc缺失,1例AZFb缺失;严重少精子症及少精子症组有2例AZFc缺失。总体AZF微缺失检出率13.7%。
2.2 AZF基因微缺失与精子密度的关系
30例无精子症患者中Y染色体AZF微缺失5例,在无精子症患者中AZF微缺失检出率16.7%;21例严重少精子症及少精子症患者中AZF微缺失2例,检出率9.5%,对照组未检出AZF微缺失。统计学分析显示各组间AZF微缺失率,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
3 讨论
据有关研究表明,有多种原因均可引起男性生精障碍,其中有近30%的患者原因不明,即排除其他男性疾病后引起的生精障碍,称为原发性不育,其中10%~15%的无精子症和5%~10%的严重少精子症及少精子症由Y染色体上AZF的微缺失造成。
目前AZF微缺失的筛选在我国尚处于新兴阶段,对严重少弱精子症和无精子症的临床指导意义却难以估量,具体表现为:(1)通过检查可以明确“原因不明”的不育患者的病因,减少无谓的“治疗”,以达到节约医疗资源及患者治疗少花费的目的,有利于社会和个人;(2)如果该类患者想以辅助生育技术达到生育目的,那么有必要对患者告知的是,其后代也存在着不育的可能,具体说来,即对于Y染色体上的AZF微缺失,可以很大程度上从父代传给子代,最有可能的后果是致使子代不育。一般说来,传统诊断手段中Y染色体培养过于耗时,并且不能区分具体位点的缺失,不利于临床治疗和诊断。所以笔者运用多重PCR技术检测Y染色体AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc3个区域中6个序列标签位点微缺失。本技术简便、快速,较之传统诊断方法节约时间,对患者损伤小。还可以避免因误诊带来的不必要的药物及手术治疗,为男性不育患者的诊断、治疗节省相当大的费用且可以提供有力的科学依据,值得临床推广应用。
(张文林,邓江锦,无精子因子微缺失与男性不育的临床研究[J]中国医药科学2012年7月第2卷第14期:234、236)