【关键词】不育;实验检测;男性
男性不育症是人类生殖研究中心的重要课题,据WHO资料显示,不育症占育龄夫妇的15%,为探讨其病因,本文就近年来在临检、生化、微生物、免疫学、内分泌学、细胞遗传学和分子生物学检验方面对男性不育症的研究结果以予介绍。
1 临床检测
1.1 选择精液涂片 Serebrovska等选择精液涂片对生育组37例与不育组67例进行精子形态及生精细胞分析,结果形态,小头及锥形头子的百分率两组问差异均有统计学意义(P<0.01),不育组生精细胞与精子比例,精原细胞百分率及次级精母细胞百分率明显高于生育组,证实可作为男性不育症疗效观察和判断预后的指标之一。
1.2 Sakamoto等用精子尾部卷曲试验与低渗肿胀试验评估精子的活动功能,结果生育组和不育组对照差异有统计学意义(P<0.01),精子卷尾率与精子尾总肿胀率高度正相关(r=0.912),精液中白细胞数大于1.0×106个/mL可能引起不育,不育组的白细胞精子症的精子总数、直线前向运动精子的百分率及总数、精子一宫颈黏液的体外穿透试验优良率、精子顶体酶活性均明显低于正常组,精子畸形率高于正常组,而精液量、精子密度、精子活率两组差异无统计学意义。
2 生化检测
某学者检测不育患者磷酯酶A2(PIA2),正常精浆0~2.9 U/L,不育组(51例)49%精浆PLA2高于2.9 U/L。Agarwal等因精索静脉曲张(VC)所致不育症患者测氧自由基,结果精索静脉血浆丙二醛(MDA)和红细胞MDA的含量明显高于对照组(P<0.01),VC静脉血谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和红细胞超氧化物歧化酶(SDD)活力低于对照组(P<0.01)。
某研究对365例不育者精子顶体酶活性测定显示,顶体酶与镜下精液白细胞数,精子畸形率显著负相关,而与精子活率、活力明显呈正相关。由精子精氨酸羧酶活性反映顶体酶的总活性显示:顶体酶活性呈正偏态分布。实验组与对照组差异有统计学意义,表明影响不育的指标均与顶体酶活性相关。有文献报道精子膜脂类过氧化反应与精子存活率有关,在健康者和不育者差异有统计学意义(P<0.01)。测精浆蛋白水解酶活力:生育组1420~2870 U/L,不育组1326~3628 U/L,液化异常或黏稠度增高的不育组540~852 U/L。用Singer法测精子透明质酸酶(HYO)是判断精子生育力的重要指标。用动力学酶法测精浆酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(ALP),男子生育力指数大于1的精液,其ACP、ALP活性明显高于生育力指数小于1者,提示在男性不育者作精液常规时,应加测ACP和ALP。用毛细管电泳仪可分离人精浆蛋白组份20余种,对无精子精液精浆蛋白分析提供了新的诊断技术。
3 微生物检测
男性不育与生殖道解脲支原体(Uu)、沙眼衣原体(CT)和阴道滴虫感染有关,而与需氧菌(葡萄球菌、大肠埃希菌)无关。某研究用免疫荧光法和分离培养对不育组768例和对照组266例检测Uu和CT,不育组和对照组Uu阳性率分别为36.5%和14.28%,CT 阳性率分别为28.64%和5.2% (P<0.01)。用电镜观察Uu感染的不育患者精子,可见部分精子的头、尾部有明显颗粒状物质吸附,将抗Uu血清做免疫酶(PAP)染色,81.81%精子上有PAP阳性的棕黄色Uu颗粒状吸附,说明Uu可吸附于精子表面,使精子钩运动负荷增加,导致部分男性不育。用PCR法测精液中巨细胞病毒,不育组阳性率30%。
4 免疫学检测
有文献报道用ELISA法检测不育组72例和对照组20例的精浆白介素8(IL-8),结果18例不育组中白细胞精子症组明显高于对照组(P<0.01),非白细胞精子组中自细胞数与精浆IL-8呈正相关(r=0.883,P<0.01)且治疗前后精浆IL-8浓度有明显差别,并与白细胞数同步下降。IL-8是反映生殖系统感染,诊断及疗效判定的良好指标。用ELISA法对72例不育者精浆中尿激酶,精浆参数生育组30例,尿激酶值(4600±1900) U/mL,精液液化不良组20例,值(2720±1331) U/mL,精子活率低下组22例,值(2447±933) U/mL(P<0.01),精浆中尿激酶含量变化可影响精子的活力和精液的液化。ELIAS法测血清抗精子抗体(AsAb)阳性率12.90% (n=31)并与人类白细胞抗原(HLA)相关。精液中存在抗精子抗体影响精子活力与精子畸形率。AsAb阳性精浆C3d及C3d/C的结果均较生育组显著增高,AsAb与精子膜固有成分结合能导致补体的活化,使C3裂解加速,进而导致精子结合功能受损。有文献报道对576例不育者测精浆免疫抑制物质(SPLM)<360 U/mL达40%,AsAb阳性率18%,SPIM与AsAb间无明显关系,但SPLM活性降低和AsAb存在是免疫性不育的主要因素。ELISA法测抗心磷脂抗体(ACA)的lgG、IgM33例,不育组IgG-ACA和IgM-ACA显著高于对照组,ACA与不育症有关。
5 内分泌学检测
刘睿智等测定不育男性血清与精浆5种生殖激素,结果显示这5种激素在血清与精浆中含量变化不一致,精浆间质细胞(ICSH),泌乳素分别与精子活力、密度呈正相关,血清ICSH、滤泡刺激素分别与精子活力、密度及血清睾酮负相关。采用比色法和原子吸收光谱法测定甲亢者精浆内中性α-葡萄糖苷酶值(18.88±17.31) U/mL,果糖(10.52±5.33) μmol/mL,锌(155.80±88.71) μg/mL,均低于正常值,早亢会影响附睾、精囊腺及微量元素的代谢。
6 细胞遗传学检测
岳林采用酶细胞化学技术观察精予尾部4种酶(SDH、LDH、ATP、ACP)活性,自发性精子活力低下者前3种酶活性下降且与生育组差异有统计学意义,ACP虽有下降但差异无统计学意义,此方法可作原因不明显男性不育诊断的补充。有研究报道,制备外周血染色体标本,对1074例男性不育者G显带分析中期分裂相25个,嵌合型加倍分析,染色体异常者113例(10.52%),其中性染色体异常98例(9.12%),以克氏征(Klinefelter’s综合征)最多(82例),常染色体异常16例(1.49%),单纯47,×Y74例,嵌合型46,XY/47,XY5例,47,XY/48,XY1例,47,XY/46,XY15P 2例,46,X男性综合征4例。在536例原发不育男性中查出染色体异常102例(19.03%),其中47××Y有92例,46,××男性5例,无精症染色体异常率为18.68%。在73例中发现23例染色体核型异常(31.50%),其中性染色体异常19例(82.66%),无精子、少精子者染色体异常20例(87%)。男性不育染色体异常,涉及性染色体和常染色体,在无(少)精子者中应进行染色体检查。YRRM基因的表达在男性不育者精子生成中起重要作用。
7 分子生物学检测
细胞内DNA结构和功能的改变如雄性激素受体基因、CyellinA基因的变化等都会对配子的形成、精子的活力产生影响。夏薇等用PCR法对340例男性不育者进行YRRM缺损情况筛查,有7例该基因缺损(2%),均表现出无精或少精。孙圆景等对30例少精不育者精液的雄性激素受体(AR)基因8个外显子(A、B、C、D、E、F、G、H)分别进行扩增分析,外显子A 即基因转录激活区发生点突变3例,插入突变4例,突变率为23.3%,外显子H发生缺失突变1例(3.3%)。外显子G发生点突变l例(3.3%),总突变率为30.3%,说明雄性激素受体基因外显子A即基因转录激活区的突变是造成少精不育的重要原因。对45例少精不育症用印迹分析(RFIP)筛选与少精不育相关的新分子标记,用PAPD(DNA)技术收集其DNA指纹片段,发现其含“AAT”和“GCG”密码子重复的中度重复顺序,说明具有RFLP现象的中度重复顺序是与精子发生相关的某一基因的表达调控部分,因其易在基因组中发生变异从而影响到精子的发生。
综上所述,精液检验项目是检查男性不育症原因及疗效观察的主要手段,也用于辅助诊断男性一些生殖系统疾病。
(彭兰,万芳,男性不育症的检测及意义[J]检验医学与临床2012年2月第9卷第4期:453-454)