附桂骨痛片复方是取自《金匮要略》乌头汤之精华组方,由附子、川乌、肉桂、党参、当归、白芍、淫羊藿、乳香8味中药组成,其独特的组方,对于阳虚寒湿型颈椎及膝关节增生性
关节炎具有良好的治疗作用,临床试验有效率达95%,是治疗此类疾病的理想药物。此复方中,附子和Jil乌中所含的乌头类总生物碱是附桂骨痛片复方中的主要有效成分。质量标准中生物碱含量的测定方法采用简单的萃取称重法H,缺乏可靠性和准确性,而目前关于附桂骨痛片复方中总生物碱含量的检测方法的相关文献报道几乎空白。为有效控制药品质量,根据生物碱和酸性染料溴甲酚绿在酸性缓冲液中形成的络合物在特定波长下有吸收的原理,本文采用酸性染料比色法测定其中总生物碱的含量,并对其方法学进行了考察。
分析方法条件优化:酸性染料比色法成功与否的关键在于水相的pH值,pH过高或过低都不能使酸性染料与生物碱完全络合,影响测量结果的真实性。分别配制pH值为3.00,3.40,3.50,3.60,4.00,4.50,5.00的柠檬酸.磷酸氢二钠缓冲液。乌头碱与BCG形成的络合物在412.5 nm波长处有最大吸收峰,因此取相同量的对照品溶液,于412.5 nm 波长处测定不同pH值水相下的吸光度值。不同pH值对乌头碱与溴甲酚绿离子对形成程度关系。结果表明在缓冲液pH值为3.50的环境下,乌头碱与溴甲酚绿离子对形成程度较大,pH值进一步加大或减小,离子对形成程度都减小。故采用pH值为3.50的柠檬酸一磷酸氢二钠缓冲液作为最适的水相。本文曾用过醋酸一醋酸钠缓冲溶液 ,可能由于它的缓冲范围比较窄。
附桂骨痛片复方中药味较多,提取液成份复杂,为考察本方法对乌头总生物碱测定的唯一性,进行专属性试验。除去处方药中川乌和附子,模仿附桂骨痛片复方的制备工艺,按上述方法制备阴性供试品溶液并在300~500 nm波长范围内扫描吸光度值,。实验结果表明其阴性样品液在412.5 nm波长处无吸收,说明该方法用于测定乌头类总生物碱有很好的专属性。目前乌头总生物碱的测定主要有两种方法:中和法和酸性染料比色法。中和法一般用于川乌、草乌、附子单味药材乌头总生物碱含量测定。本文曾尝试用中和法测定附桂骨痛片复方中总生物碱的含量,但是重现性不够理想,灵敏度差,可能是由于复方中成分复杂,干扰因素较多造成的。
采用pH值为3.5的柠檬酸.磷酸氢二钠作缓冲液,在萃取液静置0.5~3.0 h内,于412.5 nm波长处测定吸光度,稳定性良好。
乌头碱质量浓度在10.12~22.77 t~g/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9996,,l=6),其平均加样回收率为99.27%。酸性染料比色法方法准确,可作为附桂骨痛片复方的定量测定方法。