甲真菌病的验室诊断十分重要,因为有50%的甲病并非真菌感染,有时仅凭临床表现难以鉴别。由于甲板生长缓慢,加之特殊的解剖学结构,导致抗真菌治疗疗程偏长,故无法实施诊断性治疗。而真菌学检查可明确治愈标准,可在停药时判断治疗是否成功,还可在治疗失败时判断是诊断错误还是难以治愈。迄今,真菌病的实验室诊断仍依赖于直接镜检和培养。
真菌学检测的准确性很大程度上取决于标本的采集,取材时既要注意足量以保证镜检和培养的需要,更要取到感染靶位(如甲下),必要时要借助钻孔器械。将取下的甲屑置载玻片上,滴加20%氢氧化钾溶液充分(15~20分钟)溶解非真菌成分,然后直接显微镜观察。墨水或美兰染色可增加菌体的清晰度。
镜检可发现病甲中的真菌成分(孢子和菌丝)
直接镜检可以发现所检标本中是否有孢子和菌丝等真菌成分,而真菌培养可以明确致病菌种,以指导选择用药和判断疗效及预后。真菌培养要从始至终全程注意防止污染,包括取材时对病甲表面的清洁、取材器械的灭菌、培养基内即有氯霉素也含放线菌酮、接种和观察时的无菌化等。
培养时间一般为两周,必要时延长至3周。培养温度以25℃~27℃为宜。若培养出少见的菌种或两种以上真菌,要结合临床谨慎解释,如重复培养仍为前一结果则有诊断意义。镜检和或培养阴性不能完全否认真菌感染。新真菌检查技术为分子诊断,即直接扩增甲屑中真菌的DNA/RNA,其敏感性、特异性均很高,能显著缩短诊断时间,并可区分复发和再感染,但目前仍在摸索阶段。
现阶段,许多医院或皮肤科尚不具备真菌检查的条件和设备,但鉴于各种深浅部真菌感染日益多见,建议先创造条件,开展技术条件要求相对简单的真菌镜检,然后再过渡到真菌培养和药敏试验。同时,也可介绍患者到能开展真菌学检查的医院进行检查,待明确诊断后再进行治疗。