动脉粥样硬化斑块中,血管增多是其重要的病理学特征。随着研究的逐步深入,认为血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是目前已知最强、最主要的诱导血管发生的生长因子,还能诱导其他细胞因子的表达增强及表达VEGF受体的单核细胞的迁移[1]。几乎所有参与动脉粥样硬化发生发展的生长因子如转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)都能上调平滑肌细胞(SMC)、巨噬细胞和其他细胞中VEGF的表达[2]。我们应用免疫组织化学SP法,分别检测VEGF和 TGF-β在人冠状动脉粥样硬化中的表达情况,以分析它们在动脉粥样硬化中的作用和意义。
1 材料与方法
1.1 材料 收集47例2004~2005年尸检冠状动脉蜡块标本,年龄21~70岁,平均(46.6±16.2)岁。
1.2 常规病理学检查及分组 将HE染色切片在显微镜下观察,根据其基本病变的形成将病例分为3组:正常组11例,脂纹期8例,斑块期28例。
1.3 试剂 兔抗人VEGF多克隆抗体及兔抗人TGF-β多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程有限公司,SP超敏试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。三种抗体均为浓缩型,其工作浓度为1∶100。
1.4 免疫组织化学检测 将蜡块连续切片,采用SP法染色后,显微镜下观察结果。在胞膜或胞浆处有棕黄色或棕褐色颗粒状物质,呈网格状或环状沉淀者为阳性细胞[3]。在高倍显微镜下(10×40)任选10个视野,分别计数VEGF和TGF-β的阳性细胞数,计算平均值。
1.5 统计学方法 应用SPSS 10.0统计软件中的秩和检验及相关检验。
2 结果
2.1 VEGF和TGF-β在冠状动脉中的分布特点 VEGF在SMC和巨噬细胞中有表达,在斑块中表达最高。TGF-β在内皮细胞(EC)、SMC和成纤维细胞中有表达,在脂纹期表达最高。
2.2 冠状动脉中表达VEDF和TGF-β的阳性细胞数 在冠状动脉粥样硬化病变各期中,VEGF的表达呈递增趋势,其阳性细胞数在斑块期最多,与正常组比较差异有显着统计学意义(P<0.01)。TGF-β的阳性细胞数在脂纹期最多,各期与正常组相比均差异有显着统计学意义(P<0.01)。
2.3 VEGF与TGF-β表达的相关性 对全部病例VEGF与TGF-β的表达进行相关性检验,发现两者的表达呈正相关(r=0.35,P<0.01)。
3 讨论
动脉粥样硬化是严重影响人类健康的疾病之一,其发病机制越来越受到人们的关注。近年来,研究表明生长因子在动脉粥样硬化中的作用日益突出,但VEGF和TGF-β在人动脉粥样硬化病灶中的变化报道甚少[4]。
作为动脉血管壁主要细胞成分的血管平滑肌细胞(VSMC)含有VEGF基因[5]。动脉粥样硬化状态下,VSMC在诸多因素的作用下,可由收缩型转化为分泌型,分泌VEGF。本实验表明,在动脉粥样硬化斑块中SMC和巨噬细胞都有VEGF的强表达,VEGF阳性细胞数目与内膜血管化程度呈正相关,且VEGF阳性细胞的分布与新生血管的分布高度一致,即主要位于斑块肩部与纤维帽部位。因此,VEGF在血管壁血管发生中处于十分重要的地位[6]。
TGF-β与VSMC的迁移和增殖密切相关,是血管动脉粥样硬化形成和发展的促进因子和增强因子[7]。其最明显的生物学特征是促进VSMC的迁移、增殖和在血管壁细胞外基质沉积。通过促进VSMC表型转化和增殖,刺激VSMC合成胶原增多,从而加速动脉粥样硬化发生、发展的过程。本实验发现,TGF-β在VSMC、EC和成纤维细胞中为阳性,主要位于核周的胞浆中,与VEGF的表达具有相关性。说明TGF-β可能具有促进VSMC分泌VEGF增加的作用。
总之,动脉粥样硬化的发生发展是一个复杂的过程。本研究表明,动脉粥样硬化病灶中VEGF、TGF-Β的表达增加,且具有相关性,提示二者可能参与动脉粥样硬化的发生发展。如能进一步从基因水平研究二者在动脉粥样硬化形成中的机制,必将对动脉粥样硬化的预防和治疗起到巨大的推动作用。(参考文献:血管内皮生长因子与转化生长因子β在人动脉粥样硬化病灶中的表达,梁 萍,中华现代内科学杂志2007年第4卷第11期)