【摘要】目的 通过比较几种检测淋病奈瑟菌的方法,评价其在临床诊断中的应用价值。方法 收集我院2009年10月~2010年12月431例疑似淋病奈瑟菌感染患者标本,分别做直接涂片染色、培养鉴定、聚合酶链反应(PCR)、斑点金免疫渗滤(dot immunogold filtration assay,DIGFA)4种检测,以培养鉴定为对照评价各方法的临床应用价值。结果 直接涂片染色法阳性检出率低于其他三种方法(P<0.05),斑点金免疫渗滤法与培养鉴定两种检测方法阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。PCR检测法阳性检出率高于其他三种方法(P<0.05)。结论 在临床微生物诊断工作中建议选择至少两种检测方法同时检测淋病奈瑟茵以提高阳性检出率。
【关键词】淋病奈瑟茵;直接涂片染色;培养鉴定;聚合酶链反应;斑点金免疫渗滤法
淋病是最常见的性传播疾病之一,其病原体为淋病奈瑟菌(简称淋球菌,Neisseria Gonorrhoeae,NG)。淋球菌的诊断主要依靠实验室检查.当前实验室检测淋球菌的方法较多,常用的方法有直接涂片染色法(Gram Stained Direct Smears,GSDS)、培养鉴定法(Culture and Identification,CI)、聚合酶链反应法(Polymerase Chain Reaction,PCR)、斑点金免疫渗滤法(Dot Immunogold Filtration Assay,DIGFA),各检测方法结果不一致时有发生。本文以培养鉴定法为对照,对四种淋球菌检测方法作比较和评价.现报道如下。
1 对象与方法
1.1 研究对象
收集2009年l0月~
1.2 标本采集
由门诊医生进行取材.男性患者采用尿道口脓性分泌物或一次性拭子插入尿道内2~
1.3 主要仪器与试剂
淋球菌培养基购于杭州怡蓝生物有限公司.鉴定采用法国梅里埃VITEK 2 compact全自动细菌鉴定仪及其配套的原装试剂。PCR检测仪器为LightCycler,所用试剂购自广州中山达安试剂有限公司,DIGFA法所用试剂购于蓝波生物技术有限公司。
1.4 检测方法
①直接涂片染色法:按照全国临床检验操作规程进行;②培养鉴定法:取分泌物直接连续划线接种于TM淋球菌专用培养基(培养基使用前应预温于
1.5 统计学分析
采用SPSS 11.5统计软件,各检测方法淋球菌阳性检出率的比较采用4×2卡方检验,两种方法的一致性检验采用Kappa分析。检验水准取α=0.05。
2 结果
2.1 四种方法检测淋球菌的阳性检出率
431例疑似淋球菌感染患者标本分别用4种方法检测淋球菌,GSDS法阳性检出率最低,PCR法阳性检出率最高(P<0.05),DIGFA法与CI法比较差异无统计学意义,见表1。
2.2 四种方法检测淋球菌的符合度
CI法检测阳性例数97例,其中GSDS法检测为阴性25例,DIGFA法检测为阴性9例。PCR法检测为阴性1例。另外,GSDS法和DIGFA法检测阳性3例而CI法检测为阴性,PCR法检测阳性9例而CI法检测为阴性,见表2。CI法和PCR法检测淋球菌存在一致性(K=0.886,P<0.05),CI法与其他两种方法不存在一致性(P>0.05)。
3 讨论
目前临床诊断淋球菌的方法有很多,本研究选取了直接涂片染色法、斑点金免疫渗滤法、培养鉴定法、聚合酶链反应(PCR)检测法来进行比较。培养鉴定法被广泛地认为是诊断淋球菌的“金标准”,本研究以培养鉴定法为对照来比较其他几种非培养法在淋球菌诊断中的优劣。
研究结果表明,直接涂片染色法检出率最低,与钱可琼的研究结果不一致,因影响直接染色涂片法的因素有很多,如取材得当、染色效果、是否服用抗生素、检验人员镜检经验和责任心等均可影响阳性检出率。斑点金免疫渗滤法和培养鉴定法阳性检出率比较差异没有统计学意义,与刘金波等的研究结果基本一致。培养鉴定法仍为诊断淋球菌最可靠的方法,取材要求相对较高,取材不当和前期服用抗生素会导致分离培养的效果不佳。淋球菌受温度的影响较大,标本采集后应注意保暖保湿,特别是冬天在实验室外放置时间太久,培养鉴定法容易产生假阴性,需要及时送往实验室接种。淋球菌生长缓慢,使得培养鉴定法无法很好地保证临床上要求的快速确诊。斑点金免疫渗滤法阳性检出率基本上与培养鉴定法一致,能快速检测淋球菌,对淋病的早期诊断及治疗具有实用价值。PCR检测法的检出率最高,与胡凯的研究结果基本一致,由于影响PCR检测法的因素较少,与培养鉴定法比较,标本采集后不受保存温度及时间和短期内服用抗生素影响,因此其阳性检出率较高,但检测费用和设备要求也相对较高。由于检测方法和原理不同,四种方法检测淋球菌的符合度也不一致,同一标本,各检测方法结果不一致时有发生。
综上所述,直接涂片染色法作为一种快速经济简便的方法对淋球菌的诊断有着重要的提示作用,而斑点金免疫渗滤快速检测法亦可作为诊断淋球菌的参考。但是对于女性患者及慢性期的患者,培养鉴定法仍然是不可缺少的。尤其是近年来,由于淋球菌的耐药株不断出现,多重耐药的现象日益凸显,分离培养之后的药物敏感试验就显得尤为重要了。PCR检测法其灵敏度高,影响因素少,但设备要求高,对于基层医院难以开展。因此,在临床工作中为了避免漏诊误诊,建议根据实际需求至少选择两种方法同时检测以提高淋球菌的阳性检出率。
(周杨霄,黄芬,几种检测淋病奈瑟菌方法的比较研究[J]中国现代医生2012年4月第50卷第11期:88-89)