痤疮是一种毛囊皮脂腺的慢性炎症
皮肤病,多发于青春期,好发于面部等皮脂腺发达的部位[1]。中药痤疮面膜是我院的协定处方,是以中医基础理论为依据,以宣肺、清热、解毒的中药,经提取制成中药外用面膜,经临床使用观察,对炎症丘疹、丘
疱疹和脓疮为主要损害的痤疮效果明显。为了控制质量,本文对本方的主要药味大黄、蒲公英、黄柏、金银花进行薄层鉴定,同时对其中的主药金银花进行定量测定,现报道如下。
目的:制备用于治疗痤疮的中药面膜,对其进行定性定量分析,并进行临床疗效观察。
方法:将9味中药水提浓缩后,加入到面膜墓质中混匀,制得棕褐色的胶状物,对其中几味主药进行鉴别,并用薄层扫描法对金银花中的绿原酸进行含量测定。
结果:金银花中的绿原酸含量为1.084mg/g(n=5),临床应用总有效率为91.%。
结论:该中药面膜对热毒型的丘疹、脓疮为主要损害的痤疮效果明显强于替硝唑凝胶,且使用方便,可用于痤疮的临床治疗。
1 仪器与材料
Cs-9301型薄层扫描仪(日本岛津公司);电子天平(德国);各对照品(由中国药品生物检定所提供)。所用试剂均为分析纯;所用药材由汕头市药材公司提供。
2 处方与制备
2.1 处方组成 金银花、蒲公英、虎杖、山楂各12 g,黄柏、枳壳、大黄、丹参、枇杷叶各10 g,PVA-217 15 g,甘油5 g,卡松025 mL,共制成100 g。
2.2 制备方法 取上述9味中药加水适量(以浸过药材为度)煎煮至沸后60 min,滤过;残渣加水适量煎煮至沸后45 min,滤过,合并滤液,将其浓缩成稠膏状(比重约1.2 g/ mL)。另取PVA-217 15 g用适量水浸泡24 h后搅匀,加入中药浓缩液、甘油、卡松、蒸馏水使成100 g,搅拌均匀即得。
3 质量检查
3.1 性状 本品为棕褐色的胶状物。
3.2 薄层鉴别
3.2.1 大黄的薄层鉴别 对照品液的制备[2]:取芦荟大黄素、大黄素及大黄酚对照品,加氯仿溶解。制成浓度均为1 mg/ mL的混合对照品溶液。供试品溶液的制备:取样品1 g,加甲醇20 mL,搅拌冷浸1 h,滤过,取滤液5 mL,置具塞试管中,于水浴上蒸去甲醇,残渣加水5 mL溶解后,滴加盐酸0.5 mL于水浴上加热30 min,取出试管立即用水冷却,水解液用乙醚15 mL分两次提取,合并乙醚提取液,蒸去乙醚,残渣加氯仿1 mL溶解,作为供试品液。阴性对照液的制备:按处方组成称取除大黄外的其他药材,模拟供试品溶液的制备方法,制得阴性对照液l mL。薄层层析:按薄层层析的方法,分别吸取对照品液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL,分别于同一硅胶G薄层板上点样,以ψ(苯∶甲酸乙酯∶甲醇∶水)=3∶1∶0.2∶0.5为展开剂展开,取出,晾干。 以ψ(己烷∶石油醚∶甲酸乙酯∶水)=3∶1∶1.5∶0.5为显色剂,喷于薄层板上,置紫外光灯(365 nm)下观察,发现供试品在上述薄层条件下可得到较好的分离,与对照品在相应位置上可见相同的荧光斑点,而阴性对照液在与对照品液相对应的位置上无斑点,见图1。
图1 大黄的薄层层析图 略
3.2.2 蒲公英的薄层鉴别[2]对照品液的制备:取胆碱对照品,加甲醇制成0.5 mg/ mL溶液。供试品溶液的制备:取本品1 g,加甲醇20 mL,加热回流30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10 mL使溶解,滤过,滤液用乙酸乙酯提取2次,每次10 mL ,合并滤液,蒸干,残渣加甲醇使溶解,定溶于2 mL容量瓶中,作为供试品液。阴性对照液的制备:按处方组成称取除蒲公英外的其他药材,模拟供试品溶液的制备方法,制得空白对照液1 mL。薄层层析:按薄层层析的方法,分别吸取对照品液、供试品溶液和阴性对照溶液各6 μL,分别于同一硅胶G薄层板上点样,以ψ(正丁醇:乙酸:水)=4∶1∶5为展开剂,展开,取出,晾干。以碘化铋钾溶液为显色剂,喷于薄层板上,置紫外光灯下(365 nm)检视,供试品在与对照品的相对应位置可见相同的荧光斑点,而阴性对照液在与对照品液相对应的位置上无对应斑点。见图2。
图2 蒲公英的薄层色谱图 略
3.2.3 黄柏薄层鉴别[2]对照品液的制备:取盐酸小檗碱、巴马亭对照品,加甲醇溶 解,制成浓度均为0.5 mg/mL的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备:取本品1 g,加甲醇5 mL,密塞,振摇30 min、滤过,滤液作为供试品溶液。 阴性对照液的制备:按处方组成称取除黄柏外的其他药材,模拟供试品溶液的制备方法,制得空白对照液l mL。 薄层层析:按薄层层析的方法,分别吸取对照品液、供试品溶液和空白对照溶液各10 μL,分别于同一硅胶G薄层板上点样,以ψ(正丁醇:乙酸:水)=7∶1∶2为展开剂,展开,取出,晾干。置紫外光下(365 nm)检视,发现供试品在上述薄层条件下可得到较好的分离,与对照品在对应位置可见相同的荧光斑点,而阴性对照液在与对照品液相对应的位置上无对应斑点。见图3。
图3 黄柏的薄层色谱图 略
3.2.4 金银花的薄层鉴别[2] 对照品液的制备:取绿原酸对照品,用无水乙醇制成0.9 mg/ mL溶液,作为对照品液。 供试品溶液的制备:取本品1 g,加乙醇20 mL,加热回流30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加95%乙醇使溶解,定溶于10 mL容量瓶中,作为供试品液。 阴性对照液的制备:按处方组成称取除金银花外的其他药材,模拟样品制备方法及供试品溶液的制备方法,制得空白对照液1 mL。 薄层层析:按薄层层析的方法,分别吸取对照品液、供试品溶液和阴性对照品溶液各6 μL,分别于同一硅胶G薄层板上点样,以ψ(氯仿∶乙酸乙酯∶甲酸∶水)=2∶3∶I.2∶0.3为展开剂,展开,取出,晾干。置紫外光灯(254 nm)下检视,供试品在与对照品的相对应位置可见相同的荧光斑点,而阴性对照液在与对照品液相对应的位置上无对应斑点。见图4。
图4 金银花的薄层色谱图 略
3.3 含量测定 选择方中主药金银花中的主要成分绿原酸进行定量测定[3]。
3.3.1 测定条件 双波长锯齿扫描,测定波长λs 333 nm,参比波长 λR=220 nm,狭缝0.4 nm×0.4 nm,Sx=3,外标两点法测定含量。
3.3.2 测定波长的选择 将层析后的供试液及绿原酸对照品溶液在200~400 nm内扫描,结果供试品及对照品均在333 nm处有最大吸收。
3.3.3 空白干扰试验 准确吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照液各3 μL,于同一薄层板上点样,按选择的色谱条件和测定条件在333 nm处扫描,绘制吸收曲线。结果阴性对照液在与绿原酸对应位置上基本为一平线,表明在该条件下测定绿原酸无干扰。
3.3.4 标准曲线的绘制 准确吸取绿原酸对照液1、2、3、4、5 μL点于同一薄层板上,按选定的色谱条件展开后扫描,以点样量(μg)为横坐标,峰面积积分值(A)为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程为y=1140.1x-632.86,r=0.999,表明绿原酸点样量在范围内与峰面积的积分值呈良好的线性关系。
3.3.5 回收率试验 取样品1 g,精密称定,加入绿原酸对照品1.2 g,按供 试品溶液的制备方法制备回收率试验液,取3 μL点样,展开扫描,按标准曲线回归方 程计算含量,求出回收率为98.7%,RSD为1.87%(n=5)。
3.3.6 样品的含量测定 精密吸取供试品液3,绿原酸对照品液2,4,分别于同一薄层板上点样。每个样品点5个相同量的点,依法展开,采用外标两点法测定样品中绿原酸的含量。结果平均含量为1.084 mg/g,n=5。
3.4 检查 pH值为6.5,其他指标应符合中药外用制剂的质量标准。
3.5 稳定性试验 取成品3批,放置6个月后,样品的色泽、pH值、均匀度均无明显变化。
3.6 刺激性试验 取本品适量涂抹于手臂及大腿内侧,不会出现红肿等过敏反应。
4 临床应用
4.1 使用方法 面部先用水清洗干净后,取本品适量均匀涂抹于面部,待干后(约25 min)撕去面膜,每日2~3次,连续使用2周以上。
4.2 疗效标准 痊愈:皮损消退95%以上;显效:皮损消退60%以上;有效:皮损消退30%以上;无效:经2周治疗,皮损消退30%以下。
4.3 治疗效果 分别选择本院门诊患者152例用本面膜治疗做试验组,146 例以替硝唑凝胶治疗作为对照组进行疗效观察。结果:试验组,痊愈82例,显效30例,有效26例,有效率912%;对照组,痊愈48例,显效25例,有效27例,有效率68.7%。
5 讨论
痤疮是青春期的多发症,也是皮肤科临床常见病、多发病之一。本病发病原因复杂,西医尚无特效疗法[1]。 中医理论认为痤疮是肺热及血热郁滞肌肤,过食膏梁厚味,脾胃积热上蕴皮肤所致;因此,在治疗上根据其辩证结果,采用清热解毒、宣通肺腑为主,辅以清热燥湿的药物进行治疗。本方从其组方分析,金银花、蒲公英、大黄、黄柏等具有清热解毒燥湿之功,与有清热泻肿、行气的枇杷叶、山楂、枳壳合用,共奏清热解毒、宣肺燥湿之效。这与现代医学对痤疮丙酸杆菌抑菌作用的研究中虎杖、大黄、黄柏等痤疮丙酸杆菌高度敏感的结果相吻合[4]。本文通过与替硝唑的治疗效果比较,可知该中药面膜对治疗热毒型的丘疹、脓疱为主要损害的痤疮效果明显优于替硝唑凝胶,同时使用方便,值得临床推广使用。
参考来源:《广东药学院学报》2002年3月20卷1期;《中药痤疮面膜的制备与应用》;张灼锐 郑立鸿