近年来大量研究表明,免疫功能紊乱是老年人易患感染、
肿瘤等老年病的重要原因〔1,2〕。中医学认为,肾气亏虚是老年性病变的内在根据,气血虚弱是老年性病变的重要因素,
肾虚与老年病关系密切。我们以益气补肾方治疗老年气虚肾虚证患者并测定与之相关的多项免疫指标,并与对照组进行比较,旨在观察老年气虚肾虚证患者的免疫功能状况及益气补肾方对其调节作用。
目的:观察老年气虚肾虚证患者的免疫功能状况及益气补肾方对其的调节作用。方法:60例老年气虚肾虚患者被随机分为两组,治疗组和对照组各30例,治疗组以益气补肾方治疗,疗程30 d,检测T淋巴细胞亚群、自然杀伤细胞(NK细胞)、B细胞、
免疫球蛋白、补体、淋巴细胞非组蛋白图像分析(AgNors)等免疫指标于用药前后的表达情况,与对照组进行比较。结果:益气补肾方能显着提高老年气虚肾虚证患者的CD3、CD4、CD4/CD8值,提高NK细胞、AgNors水平,对免疫球蛋白、补体、B细胞无明显影响。结论:益气补肾方对与老年气虚肾虚证相关的免疫紊乱有较好的调节作用,尤其是细胞免疫,对体液免疫无明显影响。
1 对象与方法
11 对象 本研究入选病例共60例,均为2004年11月~2005年5月解放军总医院中医科高干门诊患者。其中男51例、女9例;年龄61~83(7312±454)岁;包括
高血压、
冠心病17例,房颤5例,脑梗死11例,
糖尿病11例,恶性肿瘤5例,轻度肾功能不全5例,白细胞减少症3例,帕金森综合征3例。
12 病例选择标准
121 纳入标准 根据中华人民共和国卫生部颁布的《中药新药临床研究指导原则》〔3〕和《中医虚证辨证参考标准》〔4〕中关于气虚、肾虚的诊断标准。年龄在60岁以上,男女不限;符合以下气虚和肾虚的主症各3项以上。气虚主症:神疲乏力、气短、懒言、自汗。肾虚主症:腰膝酸软、足跟痛、耳鸣耳聋、尿后余沥。舌象、脉象单独记录,未列入主证之中。
122 排除标准 不符合“气虚、肾虚”证诊断标准;不能按要求服药、复诊并完成疗程者;有免疫系统疾病患者;合并肝肾、造血系统等严重原发性疾病及精神病患者;病情危重,难以对药物的有效性
和安全性作出正确评价者。
13 分组方法 采用完全随机设计方法,分为治疗组、对照组2组,各30例,除西药治疗外,治疗组服用益气补肾方治疗,对照组不服用中药治疗。两组患者在年龄、性别、病种、西药治疗方面保持均衡,统计学无显着差异。完全随机法:先将信封依次编为1至60号,然后从随机化分组表上抄录60个随机数字。令随机数字的单数代表甲组,双数(0也作为双数)代表乙组。将确定的组别写在信封上,患者就诊时随机挑选信封入组。
14 药物制备及给药方法
141 益气补肾方制备 由解放军总医院中药房提供中草药,药物组成为生黄芪、女贞子、肉苁蓉、黄精等,由解放军军事医学科学院中药制剂室水提喷雾干燥制粒。
142 给药方法 所有观察病例保持西药治疗基本稳定,并于治疗前1个月停服一切治疗本病的其他中药。治疗组服用自制中药,对照组不服用任何中药治疗。治疗组每日早、晚2次空腹口服,每次2袋,疗程30 d。
15 试验所用主要试剂、仪器及方法
151 T淋巴细胞亚群、NK细胞、B细胞 应用美国Becton Dickion公司生产的FACSort Calibur型流式细胞仪及试剂IgGγ1FITC/IgGγ2aPE,CD3FITC /CD4PE,CD3FITC /CD8PE,CD3FITC /CD19PE,CD3FITC /CD56+16PE,FACS Lysing Solution溶血素。将细胞染色30 min,溶血10 min,3 000 r/min离心5 min弃上清,PBS洗两次,上机检测。运行Cellquest软件,进行样品测定分析。
152 免疫球蛋白、补体 应用免疫比浊法。用抗人免疫球蛋白抗体、抗人补体C3、C4抗体和样品中免疫球蛋白、补体C3、C4相结合,利用动力学原理观察单位时间内抗原与抗体结合的量来测定其浓度。采集的容器是一次性含分离胶的真空采血管,血液标本必需添加剂是分离胶。将编好号的试管,以3 000 r/min离心3 min,取出标本后去掉盖子,Beckman公司的IMMAGE特种蛋白分析仪将编好号的试管加入试管架的规定位置,放在仪器相应的标本位置,上机检测,运行软件进行样品测定分析。
153 AgNORs 应用北京健尔康公司生产的KL型肿瘤免疫图像分析仪及RPMI1640培养液,GIBCO产品,银染液(5%硝酸银)、固定液及其他配套试剂。在无菌条件下取05 ml抗凝血加到含RPMI1640培养液的瓶中,置37℃培养箱中72 h后,加2滴终止液,继续培养2 h后取出。将培养的细胞悬液轻轻混匀并吸到5 ml离心管中,1 000 r/min离心10 min;弃上清液后加入5 ml低渗液,混匀置37℃ 20 min;加5 ml固定液,混匀、离心后弃上清,重复1次;沉淀中加03 ml固定液,取2~3滴于预冷的玻片上,晾干。90℃水浴箱上置铝板,玻片置其上,热后加染液A 4滴,染液B 2滴,盖玻片,涂片成深黄色时取下,净水冲净,自然晾干。将染片置于显微镜载物台上,对焦,启动分析程序。计算30个T淋巴细胞核仁银染面积与细胞核面积比值。
16 统计学处理 数据采用STATA70软件包进行统计分析。所有试验指标中的计量资料均用x±s表示,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。
2 结果
21 对老年气虚肾虚证患者T淋巴细胞亚群的影响 老年气虚肾虚证患者在治疗前CD3低于健康人群参考区间,CD4、CD8、CD4/CD8在健康人群参考区间之内,但CD4处于低限水平。应用益气补肾方治疗后CD3、CD4亚群较治疗前有明显提高(P<005),CD8有上升趋势,但无统计学差异,CD4/CD8较治疗前有明显提高(P<005),治疗后治疗组CD3、CD4、CD4/CD8值明显高于对照组(P<005),对照组治疗前后无明显变化(P>005),见表1。
22 对老年气虚肾虚证患者NK细胞、B细胞和AgNors的影响 老年气虚肾虚证患者NK、B细胞和AgNors水平都在正常健康人群参考区间之内,AgNors和NK细胞处于低限水平,通过益气补肾方治疗AgNors和NK细胞表达明显提高(P<005),B细胞水平有上升趋势,但无统计学差异(P>005)。治疗后治疗组AgNors和NK细胞明显高于空白对照组(P<005),对照组治疗前后无明显变化(P>005),见表1。
23 对老年气虚肾虚证患者免疫球蛋白和补体的影响 老年气虚肾虚证患者IgA 、IgG 、IgM及补体C3、C4水平都在正常健康人群参考区间之内。通过益气补肾方治疗IgA 、IgG 、IgM及补体C3、C4水平较治疗前均有所下降,但均无统计学差异(P>005)。对照组治疗前后无明显差异,见表2。
表1 治疗前后T淋巴细胞亚群、NK细胞、B 细胞测定结果(略)
与治疗前比较:1)P<005;与对照组比较:2)P<005
表2 治疗前后免疫球蛋白IgA 、IgG 、IgM和补体C3、C4测定结果(略)
与治疗前比较: 均P>005
3 讨论
中医学认为衰老的原因在于五脏虚损,其中重要的机制在于肾精亏虚。随增龄人的五脏功能逐渐虚减,导致后天脏腑之精不断虚衰,脏腑功能的减退,后天脏腑之精的虚衰是肾精亏虚的直接因素。益气补肾方由生黄芪、女贞子、肉苁蓉、黄精等组成,方中生黄芪为补气之代表药,为补药之长,对人体的气血阴阳能兼而调之。女贞子、肉苁蓉,黄精与生黄芪配伍共奏补益肝肾、调达气血之功,使气血双补、阴阳兼顾,诸脏虚损得平。
本研究证实老年气虚肾虚证患者的免疫紊乱主要表现为细胞免疫功能显着下降,这与国内文献报道相符〔5〕,其中T细胞亚群、T细胞活化功能等均发生了显着改变,CD3、CD4、CD4/CD8、AgNors均有所减低。应用益气补肾方治疗后CD3、CD4、CD4/CD8、AgNors较治疗前均有明显提高(P<005)。非特异性免疫也有所减低,表现为NK细胞水平较低,通过益气补肾方治疗NK细胞表达明显提高(P<005),这与许得盛〔6〕报道一致。体液免疫变化不明显,经检测老年气虚肾虚证患者IgA 、IgG 、IgM、补体C3、C4及B细胞水平都在正常健康人群参考区间之内。通过益气补肾方治疗IgA 、IgG、IgM及补体C3、C4水平较治疗前均有所下降,B细胞水平有所提高,但均无统计学差异(P>005),这与张战平报道〔7〕不同,可能与样本数量及采集人群不同有关,有待深入研究。
本研究揭示了益气补肾方对老年气虚肾虚证相关免疫功能紊乱的部分作用机理,更深层次的机制有待进一步的探讨。
参考来源:《中国老年学杂志》2006年5月26卷5期;《益气补肾方对老年气虚肾虚证患者免疫功能的影响》;呼健 杨明会 路军章