刘奇
224000 江苏射阳县陈洋中心卫生院
(中国社区医师·医学专业2012年第22期(第14卷总第319期):300)
【摘要】目的:探讨阴道分泌物常规检查与PCR方法与效果。方法:收治细菌性阴道炎患者60例(观察组),同期选择健康成年妇女60年(对照组),取阴道分泌物后都进行常规培养镜检与PCR检验。结果:对照组的乳酸杆菌直接菌落计数平均1.62×107,观察组的乳酸杆菌直接菌落计数平均1.25×104。同时PCR得灰度值与培养的茵数值之间明显相关。结论:阴道分泌物常规检查配合PCR检查能够有效发现疾病,方法特异、快速、简便。
【关键词】阴道分泌物;细菌性阴道炎;镜检PCR
阴道的正常微生物群在维持阴道的酸性环境,预防感染等方面起着非常重要的作用。常状态下,阴道内存在的多种微生物相互影响、相互制约,形成一个动态的平衡系统,而乳酸杆菌是其中最重要、数量最多的菌群。近年来随着分子生物学技术的发展及广泛应用,PCR方法在细菌定量方面的研究越来越多,与传统方法相比在准确性和速度上都有了很大的提高。本文为此具体探讨了阴道分泌物常规检查与PCR方法与效果。
资料与方法
2008年2月~2012年2月收治细菌性阴道炎患者60例(观察组),年龄30~41岁,经临床及电镜检查确诊为细菌性阴道炎;同期选择健康成年妇女60例(对照组),年龄30~41岁。
常规检测:用无菌棉拭子采集阴道分泌物后,快速放入无菌试管,将
PCR检测:登陆GenBank,查找乳酸杆菌16sRNA的特异性序列,设计引物LbLMA正方向两条引物,引物具有乳酸杆菌属的特异性序列,该引物靶向16sRNA扩增约220bp。取处理好的乳酸杆菌纯培养菌液2μL,加入23:1的PCR混合液中。
统计学处理:使用SPSS19.0统计软件,P<0.05代表差异有显著性。
结果
常规检测结果:通过镜检,乳酸杆菌的菌落为圆形、隆起,周边整齐光滑,无色、半透明。菌体呈革兰阳性、无芽孢、细长有弯曲的杆菌,菌体可呈球杆状或杆状,排列成栅或链状。对照组的乳酸杆菌直接菌落计数平均1.62×107,观察组的乳酸杆菌直接菌落计数平均1.25×104。
PCR检测结果:经过PCR分析,对照组PCR检测的平均灰度值856.2,观察组46.2。同时PCR得灰度值与培养的菌数值之间明显相关。
讨论
阴道是人体的四大菌库之一,细菌性阴道病时,表现为占优势的乳酸菌群被阴道加德纳菌、厌氧菌和人型支原体等取代。乳酸杆菌是女性阴道的优势菌群,其发酵产酸是导致健康成年妇女阴道内的pH值通常低于4.5的主要原因。健康妇女阴道内可有一种或几种乳酸杆菌,产生的过氧化氧,是正常阴道生态系统的一个非特异性的抗生保护剂。妇女阴道内的乳酸杆菌对健康是非常有益的,而当乳酸杆菌减少时,会造成菌群失调,导致细菌性阴道炎的发生。因此,能够快速地检测阴道中乳酸杆菌的数量,对了解妇女阴道的微生态环境,指导临床治疗是至关重要的。
PCR技术的应用,使得针对细菌鉴定及定量的研究发展到了基因水平。PCR法可检测原位菌数,通过设计属特异性引物,能够检测到不能被培养的和已死的细菌,而不需要繁琐的培养富集。本组试验结果显示,健康妇女阴道分泌物中的乳酸杆菌含量一般106~108,而细菌性阴道炎患者阴道分泌物中的乳酸杆菌含量明显减少,含量一般<105。同时利用标本灰度值计算所得的结果与培养计算的结果之间明显相关,并PCR法所得的灰度值与培养计算的结果之间也存在明显相关性。
总之,阴道分泌物常规检查配合PCR检查能够有效发现疾病,方法特异、快速、简便,值得在检验中推广应用。